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3 乳酸菌青贮秸秆的研究趋势
近年来随着分子生物学的飞速发展和对乳酸菌研究的进一步深入，为人们提供了一个采用基因重组技术把外源纤维素酶的基因导入乳酸菌中的途径。应用这种构建的工程乳酸菌可以省去纤维素酶的生产和添加这一步骤，节约成本，因而，近年来，国内外利用乳酸菌表达外源纤维素酶基因的报道越来越多。Franca Rossi等（2001）将枯草芽孢杆菌的celA基因连接到大肠杆菌-植物乳杆菌穿梭载体pGIP73上，然后转化植物乳杆菌L.plantarum Lp80和L.plantarum B41。结果目的蛋白产生了43～59U/L的酶活。Liu等（2005）将瘤胃分解纤维素菌Fibrobacter Succinogenes的β-葡聚糖酶基因和Neocallimastix patriciarum的木聚糖酶基因xynCDBFV以及Piromyces rhizinflata的纤维素酶基因eglA分别连接到表达载体pNZ3004上，电转化乳杆菌L.reuteri Pg4，检测到了目的基因表达。Bates EEM （1989）、J S Cho （2000）等先后将内切葡聚糖酶基因从芽抱杆菌中克隆并分别在植物乳杆菌Lactobacillus plantarum、溶血乳杆菌Lactobacillus johnsonii及乳酸杆菌Lactobacillus gasseri中表达；Heng NCK（1997）等将浸麻芽饱杆菌Bacillus macerans来源的内切葡聚糖酶基因在瑞士乳杆菌Lactobacillus reuteri中表达。赵莹（2008）将能降解纤维素酶系中的葡萄糖外切酶CBH11基因在非抗生素抗性表达载体（pW425t）进行重组后，将其在乳酸杆菌中进行表达并对其活性检测，结果显示，转酸性纤维素酶基因工程乳酸菌具有分泌酸性纤维素酶的功能。其中，从真菌中分离的纤维素酶可以在青贮过程中起到良好的效果。这些酶可以有效地水解其中的结构多糖，产生更多的被产酸菌株直接利用的原料物质—单糖。史瑞（2010）将来自瑞氏木酶属的纤维素酶基因CBHⅡ与表达载体pET30a重组，构建了重组质粒pETCBH。将重组质粒转化Rosetta宿主菌，获得了重组菌株Rosetta（pETCBH）；利用IPTG诱导重组菌株Rosetta（pETCBH），并通过pNPC法测定了重组纤维素酶CBHⅡ的活性，其活性为2.677U/mL。并建立了一种新的REAL-TIME RT-PCR分析方法，同时利用pNPC法测定了工程菌的酶活力，为构建青贮用转纤维素酶基因乳酸菌提供了一种技术路线和对其进行相关指标评价的方法。山东大学孙磊（2005）用来自枯草芽抱杆菌Y-106的纤维素酶基因连接到大肠杆菌-乳酸菌穿梭质粒pMG36e上，电转化导入乳酸乳球菌MG1614，携带的纤维素酶基因在乳酸乳球菌中表达并有活性，其胞外酶活为0.133U/mL。
随着转基因生物技术的发展及研究水平的不断提高，通过对乳酸菌的育种和生物学特性的认识的不断深入和对纤维素酶基因的筛选及克隆的研究，将能得到更为优良的青贮乳酸菌基因工程菌，将会大大提高秸秆青贮的效果。4 小结
利用乳酸菌青贮秸秆一直是国内外研究的焦点，但由于菌种及来源、使用剂量不同，作用的秸秆也不相同，所取得的结果也不一样。用乳酸菌和纤维素酶联合发酵秸秆取得了较好的效果，应用分子生物学技术，将纤维素酶基因转入乳酸菌中，将是乳酸菌青贮秸秆的研究重点和趋势。
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